一、样品处理方法
水产、组织、蜂蜜、奶粉（牛奶）、蛋类
①取3±0.05g均质样本，加入 4ml的去离子水，0.5ml提取液A和200µl衍生化试剂，充分振荡混匀。
②置于37℃恒温箱孵育过夜（大约16h）或56℃水浴中孵育30 min以上；
③分别加入 5ml提取液B； 0.4 ml提取液C和5ml 提取液D，
④充分振荡3min；
⑤在室温下（20-25℃）4000r/min以上离心10min。
⑥取出2.5ml上层液体到另一洁净容器中于50℃氮气/空气吹干。
⑦加入 1ml净化剂溶解干燥物，用0.5ml样品稀释液充分混合30s，在室温下（20-25℃）4000r/min以上离心10min。
⑧取80µl下层用于分析。
二、 样品处理方法
(a)组织样品处理方法：
①称取3±0.05g组织样品于50ml离心管中，先加入1ml缓冲溶液混匀后再加入5ml提取剂A震荡1min，
②加入1支净化剂，充分震荡5min，室温4000r/min以上，离心5min；
③取4ml上清液于另一干净离心管中，加入20ul氧化剂混合1min，再加入4ml提取剂B充分震荡5min ，室温4000r/min以上，离心3min；
④取4ml下层液体于玻璃管中，在56℃条件下氮气或空气流吹至完全干燥；
⑤加入0.5ml去离子水溶解干燥残留物，充分混合30s。
⑥取80ul进行分析。
(b)水样品处理方法：
⑦ 直接取80ul进行分析。
三. 酶联免疫检测试剂准备
1、从4℃冷藏环境中取出所需试剂，置室温（20-25℃）平衡30m 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放入自封袋，保 存于2-8℃。
3、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品 做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
4、 加标准品/样本 50µl/孔到各自的微孔中，然后加配制好的抗体50µl/孔，用盖板膜封板，轻轻震荡混匀。25℃环境中反应30min。
四、检测方法
1、取出将孔内液体甩干，用洗液250µl /孔，洗板4－5次，每次间隔15-30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
2、加入二抗工作液50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标抗体50µl/孔，用盖板膜封板，轻轻振荡混匀。25℃环境中反应30min。
3、取出将孔内液体甩干，用洗液250µl/孔，洗板4－5次，每次间隔15-30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
4、显色：每孔加入底物液A液50µl，再加B液50µl，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色15min。
5、测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，在5min内读完数据），测定每孔OD值。
五、结果分析
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含β内酰胺酶抗生素成负相关
1、粗略判定
用样本的平均吸光度值与标准吸光度值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.310， 样本2的吸光度值为0.820，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.510；0.1ppb为1.320；0.3ppb为1.030；0.9ppb为0.660； 2.7ppb为0.389；8.1ppb为0.198。则样本1的浓度范围是2.7ppb-8.1ppb； 样本2的浓度范围是0.3 ppb-0.9 ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中β内酰胺酶抗生素实际浓度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即：百分吸光度值（%）＝B/B0×100%B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值
（2）标准曲线的绘制与计算以标准品百分吸光率为纵坐标，以β内酰胺酶抗生素浓度（ng /ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中β内酰胺酶抗生素实际含量。若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）
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