pCR@2.1克隆体系准备

1. 连接反应准备

2. 连接反应

加完试剂后，用移液器轻轻吹打混匀或者轻弹管底混匀，只能在室温（20℃-30℃）进行此反应。

3 .离心

低速瞬时离心收集所有液体在离心管底。

转 化

1. 50-100mL感受态细胞，置于室温解冻，完全解冻后（约1分钟左右）轻掸几次将细胞均匀悬浮。

2. 加入5mL连接液(最多可全部加入，只要体积不超过感受态细胞体积的1/10)，轻轻混匀，室温放置5分钟。

3. 本公司载体使用商品化的感受态细胞不需要冰浴和热休克、室温放置5分钟便可获得足够多转化子，如果实验室自制。

4. 受态细胞或者效率较低时，可以按照标准程序进行。加300-500mL LB或者SOC培养基(不含抗生素)，37℃180 rpm振荡培养10分钟。

5. 取200mL菌液涂板，培养过夜（如果预计转化子少，为得到较多克隆，4000 rpm离心1 min，吸弃掉部分上清，保 留100-150mL，轻弹悬浮菌体，取全部菌液涂板。